Étude de l'expression et du rôle de PAMR1 dans le cancer colorectal

Discipline

Molecular and cellular aspects of Biology

Classification

Sciences de la vie, biologie, biochimie,

Médecine et santé

Mots-clés libres

PAMR1, Domaine de type EGF, Cancer colorectal, Prolifération, Migration, POFUT1, Spodoptera frugiperda

Mots-clés

Cancer colorectal,

Marqueurs biologiques

Le cancer colorectal (CCR) est en train de devenir l'un des cancers les plus répandus dans le monde. Cela nécessite de mieux comprendre les mécanismes moléculaires à l'origine de son apparition et d'identifier des biomarqueurs pour une détection précoce du CCR. Dans ce travail de thèse, nous avons porté notre attention sur PAMR1 (protéine à domaine protéase associée à la régénération musculaire 1), une protéine cible de POFUT1 qui est fréquemment inactivée dans les cancers du sein et du col de l'utérus et considérée depuis comme une protéine suppresseur de tumeur. Nous nous sommes donc demandé si PAMR1 pouvait également exercer un rôle similaire dans le CCR. Notre analyse in silico a montré une quantité significativement réduite de PAMR1 dans les tissus du cancer colorectal dès le stade I, indiquant que PAMR1 pourrait être un biomarqueur précoce du CCR. PAMR1 n'a pas été détecté non plus au niveau protéique dans le sécrétome de lignées cellulaires de CCR, ce qui est cohérent avec les très faibles niveaux de transcrits exprimés par ces cellules, tels que déterminés par qPCR. Pour étudier l’effet d’un apport ou d’une expression augmentée de PAMR1 dans les lignées CCR, deux approches expérimentales ont été menées, à savoir des traitements exogènes des lignées cellulaires CCR avec ajout de PAMR1 recombinant dans le milieu de croissance et la surexpression transitoire ou stable de PAMR1 dans la lignée cellulaire HT29. Par ces deux approches, une réduction de la prolifération et de la migration des cellules HT29 a été montrée, en adéquation avec un potentiel rôle suppresseur de tumeur de PAMR1 dans le CCR. Pour l’étude précédente, nous avons dû utiliser du PAMR1 recombinant de souris, produit de manière stable par des cellules de mammifères CHO, pour traiter les lignées CCR. En effet, nous n’avons pas réussi à produire et à purifier en quantité suffisante du PAMR1 humain recombinant, que ce soit dans les cellules CHO ou dans le système d’expression baculovirus-cellules d’insectes. Dans ce dernier système, nous avons montré l’incapacité de POFUT1 des cellules Sf9 à O-fucosyler le domaine EGF-like unique de PAMR1, ce qui pourrait être une des raisons de son instabilité et de sa forte propension à la dégradation.