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Beaurain Marie
Utilisation de la [18F]-FHBG comme outil de quantification de cellules greffées intracérébrales exprimant l’HSV1-tk
Objectifs : La thérapie cellulaire constitue une thérapie innovante en neurologie afin de compenser un dommage tissulaire. Pour assurer le suivi des cellules greffées intracérébrales, nous avons étudié la faisabilité d’une technique d’imagerie moléculaire utilisant un gène rapporteur codant pour une thymidine kinase, l’HSV1-tk, et sa sonde, la [18F]FHBG permettant de visualiser l’expression de cette enzyme. Matériels et méthodes : Une lignée stable de cellules neurales exprimant l’HSV1-tk a été développée grâce à un vecteur d’expression de mammifère optimisé permettant l’expression à long terme du transgène. Après incubation avec la [18F]FHBG selon des paramètres définis, des gammes de calibration allant de 10 000 à 3 000 000 cellules Neuro2A exprimant la TK (Neuro2a-TK) ont été analysées et comptées grâce à un compteur ou une caméra TEP/CT. En parallèle, différentes quantités de cellules Neuro2a-TK pré-marquées avec la [18F]FHBG ont été greffées chez un modèle de rat ayant subi au préalable une lésion cérébrale par injection stéréotaxique de malonate. L’acquisition des images des rats greffés a également été réalisée grâce à une caméra TEP/CT. L’analyse et la quantification des données a été réalisée avec le logiciel Sisyphe sur des images fusionnées. Résultats : Le taux de captation de [18F]FHBG par les cellules est d’environ 2.52 % (n = 9). L’analyse des gammes de calibration in vitro (n=12) et in vivo (n= 5) montre une parfaite corrélation entre le nombre de cellules et l’intensité du signal même après la greffe intracérébrale des cellules. La calibration in vivo, a permis de compter jusqu’à 50 000 cellules. Ces études ont également permis la validation du protocole d’injection stéréotaxique. Conclusion : Ce type d’outil permettra le suivi longitudinal du greffon, de la viabilité des cellules mais aussi leur quantification et l’appréciation de leur biodistribution plusieurs semaines après leur injection intracérébrale.
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