Contribution à l'analyse des interactions de longue distance dans le locus des chaînes lourdes d'immunoglobulines

Discipline

Biologie Sciences Santé

Classification

Sciences de la vie, biologie, biochimie,

Médecine et santé

Mots-clés libres

gènes, cellules B, immunoglobulines, épissage (génétique)

Mots-clés

épissage (génétique) - Thèses et écrits académiques,

Immunoglobuline H - Thèses et écrits académiques

La commutation de classe des immunoglobulines permet aux cellules B exprimant les IgM et/ou les IgD d'exprimer l'un des isotypes en aval : IgG, IgE ou IgA. La commutation de classe est précédée par une transcription germinale initiée à partir d'un promoteur germinal localisé en amont des séquences "switch". La transcription germinale est en partie régulée par une région de contrôle du locus (LCR) en aval du locus des chaînes lourdes. Le gène néor est couramment utilisé comme marqueur de sélection dans les expériences de recombinaison homologue. Mais il est également utilisé comme outil pour étudier les mécanismes sous-jacents aux interactions de longue distance dans les loci complexes tels que le locus IgH. Dans ce contexte, nous avons généré deux modèles dans lesquels l'interaction de longue distance entre les promoteurs germinaux et la LCR 3'IgH est perturbée. Dans le premier modèle, nous avons généré des souris dans lesquelles le gène néor a été inséré en aval de l'exon Iγ3 en laissant intacts tous les éléments nécessaires à la transcription germinale et l'épissage normal des transcrits γ3. Les analyses phénotypiques et moléculaires réalisées sur ces souris mutantes ont montré que: 1) l'insertion du gène néor réduit la commutation de classe vers Cγ3 sans la bloquer complètement, 2) la transcription à partir du promoteur du gène néor interfère avec celle initiée à partir de Iγ3 et 3) l'insertion active deux nouveaux sites cryptiques qui sont également utilisés pour l'épissage des transcrits germinaux. Le second modèle correspond à des souris mutantes dans lesquelles la quasi-totalité de l'intron Iμ-Cμ a été remplacée par néor laissant également intactes les séquences nécessaires à un épissage correct des pré-messagers μ. Nous avons constaté une altération du compartiment B accompagnée de blocage du développement des lymphocytes B dès les stades précoces de maturation. En conséquence, une faible proportion de cellules B atteint les organes lymphoïdes secondaires.