Mise au point du séquençage haut débit des gènes des immunoglobulines et application à la recherche de BCRs stéréotypes de type « LLC » chez des patients exempts d’hémopathie

Discipline

Pharmacie

Classification

Médecine et santé

Mots-clés

Leucémie lymphoïde chronique,

Séquençage à haut débit,

Immunoglobulines

Introduction : La Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) est une pathologie d’évolution lente qui se manifeste cliniquement après 60 ans. Les clones de LLC ont un répertoire de séquences V(D)J particulier et dans 30% des cas leurs BCRs (B cell receptor) sont « stéréotypes » malgré la diversité des réarrangements possibles (1012). L’objectif principal de ce travail a été de rechercher ses séquences particulières au sein d’une population « saine » pouvant être le témoin d’une prédisposition de la sélection de ces clones. Pour répondre à cette question, nous avons développé une méthode de séquençage haut débit des gènes des immunoglobulines (NGS). Méthode : Nous avons mis au point une méthode NGS à partir d’ADN et développe un pipeline bio-informatique simple permettant le traitement de ces données générées. Une recherche de BCRs stéréotypes de type « LLC » au sein d’une cohorte de 19 patients exempts d’hémopathie a été réalisée. Résultats : La qualité des séquences obtenues par notre approche est très satisfaisante. Au niveau quantitatif, nous avons pu détecter des abondances relatives de différents clones au seuil de 1.10-4. Avec l’analyse bio-informatique mise en place, nous avons pu mettre en évidence la présence de BCRs stéréotypes au sein d’une cohorte de 19 patients exempts d’hémopathie. Discussion : D’une part, la détection de différents clones ayant une abondance à 1.10-4 démontre la grande sensibilité de notre technique et permet d’envisager cet outil dans l’étude de la maladie résiduelle dans la LLC notamment. D’autre part, la présence de BCRs stéréotypes dans une cohorte de 19 patients « sains » prouve une production physiologique, ubiquitaire de lymphocytes B type « LLC ».