Commutation de classe et effet néo sur les interactions de longue distance dans le locus des chaînes lourdes d'immunoglobulines

Discipline

Biologie Sciences Santé

Classification

Sciences de la vie, biologie, biochimie,

Médecine et santé

Mots-clés libres

modèles animaux, anticorps, gènes, cellules B, immunoglobulines

Mots-clés

Lymphocytes B - Thèses et écrits académiques,

Immunoglobuline H - Thèses et écrits académiques,

Anticorps - Thèses et écrits académiques

Le gène néoR est couramment utilisé comme marqueur de sélection dans les expériences de recombinaison homologue. Mais il est également utilisé comme révélateur des mécanismes sous-jacents aux interactions de longue distance dans les loci complexes comme le locus IgH. Dans ce contexte, mon travail de thèse a porté sur les perturbations générées par le remplacement de séquences du locus IgH par le marqueur néoR. Le premier modèle correspond à des souris mutantes dans lesquelles la quasi-totalité de l'intron Iµ-Cµ (mais laissant intactes les séquences nécessaires à un épissage correct des pré-messagers µ) a été remplacé par néoR. Nous avons trouvé que le compartiment B était profondément altéré avec un blocage dès les stades précoces du développement. En conséquence, une faible proportion de cellules B atteint les organes lymphoïdes secondaires. La transcription germinale initiée à partir du promoteur Iµ est bloquée. Dans le second modèle, nous avons généré des souris dans lesquelles le gène néoR a été inséré en aval de l'exon Iγ3 en laissant intacts tous les éléments nécessaires pour la transcription germinale et l'épissage normal des transcrits γ. L'expression du gène néoR interfère avec la transcription initiée à partir de Iγ3 et provoque une diminution de la commutation de classe vers IgG3. De plus, cette étude montre que le gène néoR apporte tous les éléments nécessaires à l'épissage des transcrits germinaux par l'activation de deux nouveaux sites cryptiques d'épissage, l'un dans la région codante du gène néoR et l'autre dans l'intron Iγ3-Cγ3. Une autre partie de mon travail a porté sur la mise en évidence d'une recombinaison interchromosomique au cours de la commutation de classe chez la souris. La première étude a été réalisée sur la lignée murine fr-Vκ pour laquelle un allèle de chaîne lourde a été rendu non fonctionnel par l'insertion d'un exon de chaîne légère entre JH4 et Eµ. Ce modèle nous a permis de montrer que le phénomène de trans-recombinaison participe activement à la commutation de classe vers IgA et IgG3. Dans une seconde étude, nous avons montré que le phénomène de trans-recombinaison participe à la commutation de classe vers tous les isotypes d'anticorps et permet la ré-expression d'un allèle exclu (au cours des réarrangements VDJ) lors du développement précoce B.