Mise au point d'une méthode utilisant des biopuces pour le diagnostic de Neuropathies Héréditaires

Discipline

Biologie Sciences Santé

Classification

Sciences de la vie, biologie, biochimie,

Médecine et santé

Mots-clés libres

maladies neurologiques, diagnostic (médecine), ADN, génétique moléculaire

Mots-clés

Maladie de Charcot-Marie-Tooth - Dissertations académiques,

Profilage d'ADN - Dissertations académiques,

Diagnostic moléculaire - Thèses et écrits académiques

La méthode de puce à ADN devient progressivement répandue et attrayante pour le diagnostic moléculaire et le génotypage des mutations. Les améliorations de cette méthode se sont principalement focalisées sur l'augmentation de sa fiabilité. Nous rapportons, dans l'étude présente, le développement d'une méthode de génotypage où une puce à ADN portant des sondes dites « en épingle à cheveux » ("hairpin") dont la structure présente une tige et une boucle. Cette puce a été particulièrement conçue pour optimiser la spécificité d'hybridation des séquences complémentaires d'ADN. Nous avons employé cette méthode pour détecter plusieurs mutations impliquées dans une pathologie neurologique appelée la maladie de Charcot-Marie-Tooth (CMT). L'ADN de témoins et de patients ont été amplifiés et marqués par PCR et ensuite hybrides sur des puces à ADN. Les intensités de signal des sondes sauvages étaient considérablement plus élevées que leurs sondes homologues mutantes différant par un seul nucléotide (taux de discrimination) pour l'ADN normal ("homozygote"). D'autre part, pour les échantillons d'ADN muté ("hétérozygote"), les intensités des signaux étaient approximativement équivalents pour les sondes sauvages et mutées (taux de discrimination proche de un aux positions de mutations). Ces résultats ont été obtenus avec des produits de PCR individuellement amplifiés, ou avec des produits de PCR multiplexe. Notre méthode de puce à ADN permet un génotypage très spécifique en combinant les sondes "hairpin" et la PCR multiplexe.