Utilisation de sources polychromes pour le diagnostic cytologique : application à l'hématologie

Discipline

Électronique des Hautes Fréquences et Optoélectronique

Classification

Sciences de l'ingénieur

Mots-clés libres

optique non-linéaire, lasers, hématologie, cytométrie en flux

Mots-clés

Cytodiagnostic - Thèses et écrits académiques,

Optique non linéaire - Thèses et écrits académiques,

Cytométrie de flux - Thèses et écrits académiques,

Hématologie - Thèses et écrits académiques,

Fluorescence induite par laser - Thèses et écrits académiques

Mon travail de thèse concerne la détection de fluorescences multiples et de signaux d'extinction résolus en longueurs d'onde pour la cytométrie en flux. Plusieurs techniques de traitement des faisceaux sont exposées dans le but d'améliorer le rapport signal sur bruit de la détection. Ces avancées permettent de minimiser les facteurs de compensations traditionnellement utilisés en cytométrie de flux. Dans une première expérience, les intensités de deux sources lasers sont ajustées dans le but d'identifier des populations leucocytaires marquées par deux types de colorants (Thiazole Orange et phycoérythrine cyanine 5 couplé à un anticorps) ayant des intensités de fluorescence fortement inégales. Dans une seconde expérience, nous montrons que l'excitation multilongueur d'onde de l'échantillon permet, dans des conditions de codage appropriées, de séparer les fluorescences provenant de microsphères différentes. Ce procédé apporte une fiabilité accrue pour la caractérisation de cellules marquées. La perspective est d'intégrer ce système dans des analyseurs d'hématologie utilisant des techniques d'immunomarquages multiples. Dans une troisième expérience, nous démontrons qu'un système laser polychromatique de type supercontinuum fonctionnant en régime déclenché avec une synchronisation des impulsions lasers sur le passage de cellules dans un cytomètre en flux permet d'identifier efficacement des populations ou souspopulations cellulaires. Les expériences ont été effectuées sur des cellules sanguines en utilisant la diffraction orthogonale et la fluorescence issue d'un colorant spécifique des acides nucléiques.