Mise au point d’une méthode de recherche large de xénobiotiques par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem

Discipline

Pharmacie

Classification

Médecine et santé

Mots-clés

Chromatographie en phase liquide à hautes performances - Thèses et écrits académiques,

Chromatographie - Thèses et écrits académiques,

Spectrométrie de masse en tandem - Dissertations universitaires,

Xénobiotiques - Thèses et écrits académiques

Dans de nombreux contextes, le screening ou criblage toxicologique est la première analyse effectuée chez un patient, lorsque la nature ou la présence même de médicaments ou de toxiques est totalement inconnue (intoxication présumée d’origine médicamenteuse ou toxique, recherche des causes de la mort, analyse d’une poudre ou d’une boisson de nature inconnue…). Le plus souvent, le screening précède la mise en oeuvre de méthodes quantitatives spécifiques. Pour les screenings développés par LC-MS/MS, les molécules peuvent être recherchées de manière ciblée (Multiple Target Screening ou MTS ; Multiple Reaction Monitoring ou MRM) ou de manière non ciblée (General Unknown Screening ou GUS). Notre objectif était de développer des méthodes de screening sur un spectromètre de masse en tandem de dernière génération (modèle 8060 ; Shimadzu). Une bibliothèque regroupant les paramètres spectraux et chromatographiques d’environ 1 300 molécules a été construite. Sur la base de cette bibliothèque, trois méthodes d’acquisition ont été développées : une méthode MRM classique, une méthode MRM dite « spectrum mode » (permettant de construire un spectre de masse où chaque ion fils a été obtenu à une énergie de collision optimale) et une méthode MTS. Une méthode d’extraction commune basée sur l’utilisation des sels QuEChERS a été développée pour permettre l’analyse d’échantillons sanguins et urinaires. Pour les trois méthodes d’acquisition, de très bonnes performances qualitatives (capacité à détecter les molécules), mais également quantitatives (mesure des concentrations après acquisition) ont été démontrées pour un très large panel de molécules d’intérêt.